小鼠海马神经元HNC原代细胞的分离简介海马体Hippocampus又名海马回、海马区是位于脑颞叶内的一个部位的名称人有两个海马分别位于左右脑半球。它是组成大脑边缘系统的一部分担当着关于记忆以及空间定位的作用。名字来源于这个部位的弯曲形状貌似海马。在阿兹海默病中海马体是首先受到损伤的区域表现症状为记忆力衰退以及方向知觉的丧失。二、材料1、实验动物1-3天的BALB/C小鼠6只雌雄不限2、组织来源海马组织3、手术器材手术剪镊、解剖镊、眼科剪镊4、消化酶0.25%胰酶5、培养基 ① DMEM/F1210%FBS1%PS ② Neurobasal A 2% B271%PS1%L-Glu6、包被条件0.1mg/ml的多聚赖氨酸三、实验步骤1. 将浓度为0.1mg/ml的多聚赖氨酸加入T25培养瓶中以覆盖培养瓶底部为准37℃培养箱内放置2h或4℃包被过夜临用前用PBS清洗3次于超净台中晾干备用。2.将小鼠置于75%酒精浸泡5min。3. 于解剖镜下迅速剥离大脑并置于DMEM基础培养基中分离出海马用手术镊剔除海马上附着的血管膜将海马分离干净。4. 取回放入超净台内用眼科剪将海马剪成1 mm³左右的组织块。5. 加入4ml的0.25%胰酶消化在37℃的培养箱里消化15min每5min观察消化情况并用移液枪轻轻吹打数次具体消化时间根据实际消化情况来定。6. 用含10%FBS的DMEM/F12培养液终止消化收集上清400目筛网过滤用15ml离心管收集细胞1000rpm/min离心5min弃上清液加入含10%FBS的DMEM/F12培养基重悬轻轻吹打将细胞均匀分布于T25培养瓶中。7. 4h后全量换成专用的神经元培养基Neurobasal A B27进行培养每隔2d更换神经元培养基继续培养半量换液。实验过程图片图1 取出小鼠的大脑图2 沿矢状缝拨开皮层暴露出海马图3 分离并去除血管膜后的海马图4 剪碎消化过程各阶段的小鼠海马神经元细胞照片白光图5、6 原代培养第2天胞体逐渐变大神经元开始长出12个突触100X、200X图5 100X图6 200X六、小鼠海马神经元的荧光鉴定后续免疫荧光鉴定云克隆拥有总面积超过2500平方米的动物设施和实验平台其中SPF级动物房总面积超过800平方米持有《实验动物生产许可证》和《实验动物使用许可证》。细胞从来源到制备全过程可追溯、批间一致可控不依赖外购组织稳住了产品质量的下限。放眼全球很少有供应商能把犬源原代细胞的物种谱系做得这么全从骨骼肌细胞、滑膜细胞、心包膜间皮细胞到视网膜神经节细胞再到本次的主角大脑皮层神经元细胞云克隆已构建了覆盖犬、猫、猪、羊、兔等十余个物种的超过560种原代细胞产品矩阵 可提供超过3000种细胞制剂。75%以上客户位于欧美市场产品远销全球——说明中国企业在原代细胞这个赛道里已经不只是“够用”而是“能打”。
